HPLC、红外分光光度、旋光仪怎么使用？最好附上视频和图片！
HPLC、红外分光光度、旋光仪怎么使用？最好附上视频和图片！ 10
还有问题就是四舍五入的特殊情况是怎么样的？电子天平的精确度是千分之一、万分之一等等各适合称哪个质量段的物质、、、、、给的分数有点低，问题有点多，请好心人帮个忙。
我们一般是四舍六入五取偶的,不过如果五后面还有数字的就要进,如24.5取24,24.51取25
称量具体看标准要求到多少位吧,上有写名&约& &精密称取&等的要求的,一般对照用到的.仪器说起来太长了,只能说一下一般HPLC步骤是换好纯水,PURGE水相通道,水洗柱(要有小比例的有机,否则怕冲垮柱子),设好标准平衡柱子,进样,洗柱和封柱还有处理数据
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四舍五入就是4退下5进上 你懂了么 好心人在这里 麻烦给分了 也许我依然坚强 可是我不在流浪。。。。 生活在冥冥之中 早已注定 欢喜 忧伤。。。。。。。。 对不对啊
HPLC的使用比较麻烦，一时说不清楚，红外嘛，关键是压片，实验环境要严格控温控水，所测物质也要是纯物质，并最好要做除水处理，就可得到想要的图谱了~！旋光仪嘛，就是要注意排气泡啊~！这些仪器我们实验室都有，有机会教你啊~！哈哈…… 我是你本家~！知道我是谁了吧！~！~
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高效液相色谱法（HPLC）测茶叶中有效成分的含量
有效成分包括“表儿茶素，儿茶素，咖啡因，没食子酸”.主要是实验步骤，谢谢大家啦
高效液相色谱法是以液体作为流动相，借助于高压输液泵获得相对较高流速的液流以提高分离速度、并采用颗粒极细的高效固定相制成的色谱柱进行分离和分析的一种色谱方法。在高效液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相，极性流动相，即构成反相色谱分离系统。反之，则称为正相色谱分离系统。反相色谱系统所使用的流动相成本较低，应用也更为广泛。中国是茶的故乡，制茶、饮茶已有几千年历史，名品荟萃，主要品种有绿茶、红茶、乌龙茶、花茶、白茶、黄茶。茶有健身、治疾之药物疗效，又富欣赏情趣，可陶冶情操。茶叶的营养价值和药理作用是与它的化学成分分不开的。它的化学组成约有四百多种，其中对人体营养价值与药理作用关系比较密切的是多酚类、生物碱和维生素。茶多酚类物质是茶叶主要的呈味物质，苦味。茶叶中含量比较高，总量占干茶物质的18％～36％，是茶叶药用价值的最主要的物质基础，具有降血脂、抗肿瘤、抗脂质过氧化、抗菌和抗病毒、调节免疫功能等功效。茶多酚实际上是多种多酚类化合物的总称，其中最重要的是儿茶素类化合物，它占茶多酚总量的50％～70％。茶叶指纹图谱是利用茶内含物质的秘密、茶树遗传的密码、用图谱的方式来表述具有不同特性的茶叶,可包含种类、产区、树龄、特性、制成品的年份等。本实验用HPLC对茶叶的主要成分进行分离，是建立茶叶指纹图谱的基础。实验过程中有可能会带入一些杂质，因此实验结束后必须清洗柱子。三、仪器与试剂
1. 仪器：Agilent1100 高效液相色谱仪， 50ul微量注射器。2. 试剂：（1）甲醇
色谱纯。（2）乙腈
色谱纯。（3）甲酸
分析纯。四、实验步骤1、色谱条件色谱柱：色谱柱：XB-Phenyl ,5μm,4.6x150mm柱温：室温流动相：乙腈
1%甲酸 /%检测器：DAD。检测波长：276nm进样体积：20??l定量环，实际注射每次可控制在50??l。梯度洗脱：2、待测溶液的配制取两种不同的绿茶，分别标记为绿茶1、绿茶2。各取约0.8000g，用50ml沸水冲泡，分别在10min、30min取上清液，过0.45μm滤头，即得样品1（绿茶1冲泡10min）、样品2（绿茶1冲泡30min）、样品3（绿茶2冲泡10min）、样品4（绿茶2冲泡30min）。4、色谱测定(1) 按操作规程开启电脑，开启脱气机、泵、检测器等的电源，启动Agilent 1100在线工作软件，设定操作条件。流量为1.00ml/min。(2) 待仪器稳定后，开始进样。将进样阀柄置于“LOAD”位置，用微量注射器吸取混合物溶液50ul，注入仪器进样口，顺时针方向扳动进样阀至“INJECT”位置，此时显示屏显示进样标志。(3) 记下各组分色谱峰的保留时间及峰面积。并将测试报告打印成htm式，以便直接贴到实验报告中。(4) 实验完毕，清洗系统及色谱柱。
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高效液相色谱仪操作步骤：　1)． 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。2)． 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3)． 打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。4)． 进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。5)． 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。6)． 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。7)． 设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。8)． 进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。9)． 关机时，先关计算机，再关液相色谱。10)． 填写登记本，由负责人签字。
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出门在外也不愁高效液相色谱_电喷雾飞行时间质谱分析丹参中的丹参酮类化合物83
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高效液相色谱_电喷雾飞行时间质谱分析丹参中的丹参酮类化合物83
第29卷第5期2008年9月；质谱学报；JournalofChineseMassSpec；Vol.29No.5Sep.2008；高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱分析丹参中的丹参；刘1,杨黄浩2,黎先春2,王小如1,2；(1.厦门大学化学化工学院化学系,现代分析科学教；摘要:采用高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱(HP；中图分类号:O657.63文献标识码:A
　第29卷第5期2008年9月质谱学报JournalofChineseMassSpectrometrySocietyVol.29 No.5Sep.2008高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱分析丹参中的丹参酮类化合物刘 1,杨黄浩2,黎先春2,王小如1,2(1.厦门大学化学化工学院化学系,现代分析科学教育部重点实验室,福建厦门 .国家海洋局第一海洋研究所,青岛市现代分析技术及中药标准化重点实验室,山东青岛 266061)摘要:采用高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱(HPLC-ESI/TOFMS)联用技术,研究4种丹参酮的分子结构与裂解规律间的关系,并对丹参酮中的脂溶性成分进行鉴定。采用反相C18色谱柱,以甲醇-0.1%乙酸+5mmol#L-1乙酸铵溶液为流动相,二元等度洗脱。通过与电喷雾飞行时间质谱联用,获得丹参中脂溶性成分的精确相对分子质量和分子式,采用质谱碰撞诱导解离技术获得各化合物碎片的裂解信息,并对丹参中的16种丹参酮类化合物进行了初步鉴定。研究结果表明,高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱联用技术能够简便、快速、有效地鉴别丹参中的丹参酮类化合物。关键词:高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱;丹参;丹参酮中图分类号:O657.63
文献标识码:A
文章编号:08)05-261-07AnalysisofDiterpeneQuinonesinDanshen(SalviaMiltiorrhizaBunge)byHPLC-ESI/TOFMSLIUJie1,YANGHuang-hao2,LEEFrankSen-chun2,WANGXiao-ru1,2(1.DepartmentofChemistryandtheKeyLaboratoryofAnalyticalScienceoftheMOE,CollegeofChemistryandChemicalEngineering,XiamenUniversity,Xiamen.QingDaoKeyLabonAnalyticalTechnologyDevelopmentandStandardizationofChineseMedicines,FirstInstituteofOceanography,StateOceanicAdministration,Qingdao266061,China)Abstract:ThediterpenequinonecomponentsinlipidsolublefractionsofDanshenwerestudiedbyHPLC-ESI/TOFMS.Thelipidsolubleswereextractedwithamixtureofchloro-formandmethanol(1B4,V/V).Theextractwasdriedbyagentlestreamofnitrogen,andtheresiduewasdilutedinmethanolforanalysis.HPLCwasperformedonareversed-phaseC18columnusingisocraticelutionwithamixtureofmethanolandwaterwiththeadditionof0.1%aceticacidand5mmol#L-1ammoniumacetate.Accuratemolecularweightsofind-ividualtanshinonesweredeterminedthroughESI-TOF/MSon-linedetection.Themolecular收稿日期:;修回日期:基金项目:国家自然科学基金/面上项目0()和青岛共建生物医药研发测试中心项目(LS-05-KJZX-76)资助作者简介:刘 (1981~),男(汉族),山东烟台人,博士研究生,从事中药色谱质谱分析研究。E-mail:.cn通信作者:王小如(1949~),女(汉族),辽宁大连人,教授,从事光谱质谱分析研究。E-mail:.cn262质谱学报
第29卷formulaandTOFMSfragmentationbehaviorofeachcompoundwereobtainedthroughoff-lineanalysisunderdifferentcollisioninduceddissociation(bininglitera-tureinformationwiththeobserveddata,16tanshinonesinlipid-solublefractionsofDansh-enweretentativelyidentifiedinarun.Themethoddemonstrateshighpotentialasarapidandeffectivemethodforthepreliminarystructuralscreeningandspeciationofbioactivetan-shinonecomponentsinDanshenorotherherbalextracts.Keywords:highperformanceliquidchromatography-electrospraytimeofflightmassspec-trometry(HPLC-ESI/TOFMS);Dtanshinones
丹参是传统中药,它是唇形科鼠尾草属植物丹参(SalviamiltiorrhizaBunge)的干燥根及根茎,是中国药典收载的主要经典药材之一。丹参的脂溶性有效成分主要由具有二萜醌结构的丹参酮类化合物组成,这些化合物具有扩张冠状动脉、增加血流量的作用,对冠心病、心肌梗塞等疾病有一定的疗效[2-3]。近年来,国内外对丹参脂溶性成分的研究主要集中在对4种丹参酮主要成分的分离及其含量的测定,其中液相色谱技术以及液相色谱-质谱联用技术运用最为广泛[4-7],并且多级质谱也已应用于几种丹参酮结构的解析及其代谢物的表征[8-12]。相比其他质谱,飞行时间质谱具有高分辨能力,能够测得化合物的精确相对分子质量。于文佳等[13][1]酸(优级纯):德国Riede-ldeHaen公司产品;乙酸铵(优级纯):美国Fluka公司产品;水:Mill-iQ超纯水。1.3 试验条件1.3.1 提取条件 准确称取75mg丹参样品粉末,放入25mL带塞的三角瓶中。准确加入10mL二氯甲烷-甲醇(体积比为1B4)混合溶剂,常温下超声振荡提取30min,静置15min,过滤,常温下经氮吹至干,加入2mL甲醇溶解,过0.45Lm滤膜后作为供试样品溶液。1.3.2 色谱条件 色谱柱:BECKMANODS-C18(4.6mm@250mm,5Lm);流动相为20%A:水(0.1%乙酸+5mmol#L-1乙酸铵)-80%B:甲醇,等度洗脱;流速0.8mL#min-1,柱温通过飞行时间质谱对未经30e,进样量为10LL,UV254nm作为检测波长;分流比为1B1,即进入高分辨飞行时间质谱的流动相流速大概为0.4mL#min-1。1.3.3 质谱条件 电喷雾正离子电离模式;质量扫描范围m/z150~1000;毛细管电压4kV;喷雾气压2.76@10Pa;干燥气流速10.0L#min-1;气体温度300e;裂解电压300V;锥孔电压60V;参比溶液m/z922.0098;分辨率2.0098)。5分离的丹参脂溶性提取液中各成分的精确相对分子质量进行了测定。本工作进一步采用与高效液相色谱联用的技术,结合从碎片离子获得的化合物结构信息,在一次分离过程中实现对丹参酮脂溶性成分中16种化合物快速、有效地鉴定,以提高化合物鉴定的准确性。1 试验部分1.1 主要仪器与装置Agilent1100高效液相色谱仪:美国Ag-ilent公司产品,配有二极管阵列(DAD)检测器;AgilentG1969型电喷雾飞行时间质谱仪:美国Agilent公司产品。1.2 主要材料与试剂丹参药材:河北同仁堂提供;丹参酮标准品(二氢丹参酮I、丹参酮I、隐丹参酮和丹参酮IIA(纯度&95%)):中国药品生物制品检定所;:;2 结果与讨论2.1 色谱质谱条件的选择本实验以不同比例的甲醇和0.1%乙酸+5mmol#L-1乙酸铵溶液作为流动相,考察各种梯度洗脱以及不同流动相流速所产生的结果,最终选用1.3.2色谱条件对供试样品溶液进行分离。在254nm紫外波长下丹参脂溶性成分的液相色谱图示于图1a,各组分之间都达到了第5期
刘 碌:高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱分析丹参中的丹参酮类化合物263间质谱总离子流图示于图1b,基本上每个组分都有很好的质谱信号响应,与紫外吸收的信号一一对应。在电喷雾正离子模式下对流动相的酸度、破碎电压(fragmentor)、毛细管电压等条件进行了优化筛选,结果表明,其他参数对质谱信号的影响不明显,而破碎电压对质谱特征信号有一定的影响。当破碎电压较小(200V)时,二氢丹参酮I的质谱信号以分子离子峰(m/z279.1010)为主(图2a);当电压升至400V时,分子离子破碎严重,两种情况下所得质谱图均无法反映化合物的结构信息(图2b);当破碎电压为300V时,图谱中的各碎片离子峰强度适中(图2c),这些碎片离子信息有效地反映了化合物的结构信息。图1 丹参脂溶性成分的液相色谱图(a)及其总离子流图(b)Fig.1 Liquidchromatogram(a)andtotalionchromatogram(TIC)(b)oflipidsolublecomponentsofDanshen2.2 四种主要丹参酮的高分辨质谱分析二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA(图1中的6、10、11、16号峰)是丹参脂溶性成分中四种主要化合物,关于它们的结构及其在离子阱、四极杆质谱中裂解过程的研究已有报道[8-10]以及出峰位置均与实际测得的结果吻合,更进一步说明推测所得的分子式准确可信,大大增加了化合物定性的准确性。表1中其他碎片离子均采用相同方式推测得到。由表1所得各碎片离子的分子式可以看出,在一定能量碰撞下,二氢丹参酮I丢失一个CH3生成m/z264.0781离子,该碎片再接着丢失一个H2O和CO,裂解成m/z246.0671和m/z218.0725离子;二氢丹参酮I也可以先丢失一个H2O形成离子m/z261.0906,再接着失去一个CO形成m/z233.0958,或者先丢失一个CO形成离子m/z251.1061,紧接着失去一个H2O形成相同的m/z233.0958,该碎片还可以再丢失一个CO裂解成m/z205.1009。因此,二氢丹参酮I主要通过丢失CH3、H2O、CO等中性小分子而发生裂解。另外三种主要丹参酮的分子离子及其碎片离子经由相同方法,(、,隐丹参酮和丹参酮IIA的裂解机理也已进行过讨论[11-12]。本工作应用高分辨飞行时间质谱可测得丹参酮及其裂解后产生的各碎片峰的精确质量数,以二氢丹参酮I为例,示于图2c,再通过系统自带的AnalystQS软件,推测出各自对应的分子式列于表1。由表1可知,m/z301.0830离子峰对应的分子式为C18H14O3Na,即二氢丹参酮I分子加上一个钠离子形成的离子峰,测得质荷比与该分子式的理论质荷比(m/z301.0835)仅有1.7124ppm的误差;加之采用AnalystQS软件的同位素匹配功能对该离子峰的同位素峰进行匹配,示于图264质谱学报
第29卷图2 不同破碎电压下二氢丹参酮I的质谱图(a)200V;(b)400V;(c)300V;(d)二氢丹参酮I加钠峰的实际同位素峰与理论同位素峰对比Fig.2 MSspectraofdihydrotanshinoneIunderdifferentfragmentorvoltages(a)200V;(b)400V;(c)300V;(d)comparisonofobservedandcalculatedisotopicpeaksof[M+Na]+其电喷雾质谱裂解机理与二氢丹参酮I相似,主要也是通过丢失CH3、H2O、CO以及O等中性小分子而发生裂解,其中隐丹参酮和丹参酮IIA的裂解机理与文献[11-12]一致。鉴于四种丹参酮拥有相似的结构,该裂解规律被认为是二萜醌类结构的特征裂解规律,可通过该规律对其他丹参脂溶性物质的结构进行推测。2.3 丹参中其他脂溶性成分分析对图1b中其他离子峰采用2.2中应用的分析方法,测得各离子峰的保留时间、精确质量数、碎片离子以及推测所得分子式,列于表2,并对各峰所属化合物做出初步判定。图1b中的1号峰(Rt=4.73min)经质谱分析结果显示,m/z311.1271离子峰为基峰,推测得到分子式为C19H19O4。碎片峰显示先脱去一分子H2O形成m/z293.1173离子,该碎片再接着丢失一分子H2O形成m/z275.1066离子,即连续丢失两个H2O,这是羟基化取代物的特征裂解规律,并且由分子式可知该化合物比丹参酮IIA(3献[12]报道的丹参酮IIB的碎片离子完全一致。因此,1号峰所属化合物被认为是丹参酮IIA的一种羟基化物丹参酮IIB(tanshinoneIIB)。图1b中2号峰(Rt=5.87min)的分子离子峰为m/z341.1381,经推测得到分子式为C20H21O5,由碎片离子可知在裂解过程中丢失了CH3、H2O、CO等中性小分子,符合丹参酮的电喷雾质谱裂解规律,可初步确认该峰具有二萜醌类结构。同时碎片离子m/z309.1121的存在,说明分子离子在裂解过程中丢失了一个m/z32碎片,被认为是一个OCH3,接着又丢失一个m/z14的碎片形成m/z295.1330,被认为是一个CH2。此外,由碎片离子可知,在裂解过程丢失了3个CO,因此可推测该化合物含有3个羰基。根据以上分析,再结合文献[14]可知,2号峰所属化合物为二氢丹参酮酸甲酯(methyldihydronortanshinonate)。5号峰(Rt=7.57min)的分子离子峰为m/z,其分子式经推测为C20H19O5。由产生的碎片离,2第5期
刘 碌:高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱分析丹参中的丹参酮类化合物265化合物一致,说明这两个化合物具有相同的结构,再比较两者分子式发现仅相差两个H,结合文献[14],5号峰对应化合物被认为是丹参酮酸甲酯(methyltanshinonate)。在图1a中可见3号峰的紫外响应,但该峰所属化合物在电喷雾质谱中没有响应,因此无法对其进行鉴别。4号峰(Rt=6.81min)的分子离子峰精确质量数经测量为m/z309.1120,其分子式经推测为C19H17O4。由碎片离子可以明显观察到丢失3个CO,推测该化合物含有3个羰基,与文献[14]中的拟丹参醛(tanshina-ldehyde)一致。7号峰(Rt=8.64min)的分子离子峰为m/z315.1591,其分子式经推测为C19H23O4。该分子离子峰在裂解过程中连续丢失两个H2O,产生碎片离子m/z297.1476和m/z279.1426,这是羟基化取代物的特征裂解规律。分子离子峰还接连丢失一个C3H6O和一个CH2,形成两个明显的碎片离子峰m/z268.1074和m/z254.0934。结合文献[14],观察裂解规律,发现7号峰对应化合物符合新隐丹参酮(neocryptotanshinone)的结构。8号峰(Rt=9.11min)与12号峰(Rt=11162min)的分子离子峰在低分辨质谱中测得的质量数相同,均为281.1,但在高分辨质谱中能够测得其精确质量数的差异,分别为m/z和m/z281.1533,经推测得到分子式分别为C18H17O3和C19H21O2,这充分说明了飞行时间质谱的高分辨率能够区别其他质谱无法分辨的所谓/同分异构物0。12号峰的分子离子峰在裂解过程中连续丢失两个CH3和一个CH,形成离子m/z266.1304、m/z251.0994以及m/z238.1317,即丢失了一个异丙基。结合文献[14],12号峰对应化合物被认为是去氢丹参新酮(dehydromiltirone)。而8号峰的分子离子峰却观察不到相同的裂解规律,说明8号峰对应化合物中不含有异丙基结构。通过比较分子式发现,该化合物比二氢丹参酮I多了两个H,并且其裂解过程与二氢丹参酮I相似,结合文献[15],推断8号峰对应化合物为四氢丹参酮I(tetrahydrotanshinoneI)。15号峰(Rt=15.01min)的分子离子峰为m/z,分子式经推测得到C19H23O2,比12号化合物多了两个H,并且其裂解过程与12号化合物一样,说明两者具有相同的结构,那么15号峰对应化合物则被认为是丹参新酮(miltirone)。9号峰(Rt=10.00min)的分子离子峰为m/z265.1221,通过精确质量数推测得到分子式为C18H17O2。碎片离子m/z250.0992,m/z237.1278及m/z222.0951明显可见,说明分子离子在裂解过程中连续丢失两个CH3及一个CH,即一个异丙基,之后又丢失一个CO和一个CH3,产生m/z179.0853离子。该裂解规律显示出9号峰对应化合物的结构特点与文献[14]报导的丹参新酮I(miltironeI)的结构一致。13号峰(Rt=12.44min)质谱分析结果显示,m/z293.1165离子峰为最大质量峰,分子式推测结果显示分子式为C19H17O3,其裂解过程显示了一个异丙基的丢失,形成离子m/z250.1053。其余小分子碎片离子的丢失符合二萜醌类结构的电喷雾质谱裂解规律,可初步确认该峰所对应的化合物属于丹参酮类物质,含有异丙基结构,但在之前的文献中未见报导。14号峰(Rt=13.46min)经质谱分析可知,m/z279.1016离子峰为分子离子峰,分子式为C18H15O3。由碎片离子显示裂解过程中丢失了CH3、H2O、CO等中性小分子,属于丹参酮类化合物。结合文献[14]可知,符合该分子式以及电喷雾裂解规律的丹参酮类化合物具有三种异构体,分别是1,2-二氢丹参醌、亚甲基丹参醌和二氢异丹参酮I,由于缺乏其他的相关信息,无法确认属于哪一个化合物。包含各类专业文献、行业资料、生活休闲娱乐、高等教育、应用写作文书、中学教育、专业论文、文学作品欣赏、外语学习资料、高效液相色谱_电喷雾飞行时间质谱分析丹参中的丹参酮类化合物83等内容。　
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