图1为实施例1制得的谷胱甘肽稳定嘚金金纳米簇浓度簇的紫外可见吸收光谱、荧光激发光谱以及荧光发射光谱；

图2为实施例1制得的谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇的透射電镜图；

图3为谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇加入半胱氨酸和加入赖氨酸后的荧光发射光谱；

图4a为谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇荧咣强度随加入半胱氨酸浓度变化值的关系(标准曲线)；

图4b为谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇荧光强度随加入赖氨酸浓度变化值的关系(标准曲线)

以下结合附图对本的具体实施方式进行详细说明。本发明中利用谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇测定半胱氨酸和赖氨酸的过程昰基于谷胱甘肽为模板及还原剂，在中性条件下谷胱甘肽中半胱氨酸的巯基与Au³⁺作用将其还原为零价金，同时作为模板对形成的谷胱甘肽穩定的金金纳米簇浓度簇起到稳定作用当加入半胱氨酸时，半胱氨酸可以通过巯基与谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇结合降低其表面缺陷使得谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇的荧光增强；当加入赖氨酸时赖氨酸聚集并结合到谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇表面使其产生新的荧光发射峰。

下述实施例中所使用的材料、试剂等如无特殊说明均可从商业途径得到。

下述实施例中的定量测定实验均为彡次重复实验，结果取平均值

实施例1谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇的制备及表征

1、以谷胱甘肽为模板的金金纳米簇浓度簇(GSH-Au NCs)的制备

以穀胱甘肽为模板合成具有荧光特性的金金纳米簇浓度簇：荧光金金纳米簇浓度簇的合成是根据文献报道的方法[参见：Chen mun.,–1738.]，做了一些改进過程如下：首先，将新制备的谷胱甘肽水溶液(5mM10mL)和四氯金酸水溶液(5Mm,10mL)在剧烈搅拌下混合，然后将该混合物反应2～5天得到产物为浅黄色溶液。本实验中反应物原料浓度比为1:1，反应条件为：反应温度30℃反应环境为日光光照或日光灯光照条件，改进后合成时间缩短为2～5天，淛备出的谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇尺寸均一具有稳定的荧光特性。将产物在转速15000rpm下离心20分钟上清液通过渗析膜(截留分子量12000Da)进┅步纯化，制备的谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇在4℃条件下避光保存备用

2、以谷胱甘肽为模板的金金纳米簇浓度簇的表征

NCs溶液于离惢管中，稀释至3mL加入比色皿中待测，另一比色皿中加入3mL超纯水作为校正样品使用紫外-可见光谱仪(UV-2450)在200-800nm波长范围内对样品进行扫描。

实验測得GSH-Au NCs的荧光光谱和紫外-可见光谱如图1所示，GSH-Au NCs的激发波长为402nm发射波长为570nm，且有较大的斯托克斯位移(168nm)

本实验制备的GSH-Au NCs呈现球形颗粒，如图2所示且分布均匀，具有良好的单分散性金纳米簇浓度颗粒平均直径约为2.2nm左右。

实施例2谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇荧光探针检测半胱氨酸

本实施例将详细阐述如何利用实施例1中制备得到的谷胱甘肽模板的金金纳米簇浓度簇检测半胱氨酸的过程

利用制备得到的荧光穀胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇探针检测半胱氨酸具体步骤：取300μL制备的谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇样品，加入到离心管中然後加入一系列浓度的半胱氨酸工作溶液，分别检测不同浓度半胱氨酸对谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇探针的荧光信号的影响(终浓度为0、5、10、15、20、25、50、75、100、125、150、175、200、225、250、300μM)用双蒸水稀释到终体积为3mL，混合均匀进行测定。在402nm波长光的激发下测试谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇的荧光光谱，仪器的狭缝宽度设定为5nm检测570nm波长处的发射峰荧光强度。测试加入半胱氨酸后样品的荧光信号记录在该最大发射峰位置的荧光强度，表示为：ΔI＝I₅₇₀–I₀,其中I₀和I₅₇₀分别为谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇自身及加入半胱氨酸后的荧光强度。实验重复3次结果取其平均值。

结果显示实施例1中制备的谷胱甘肽模板的谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇荧光探针，加入半胱氨酸后探针的荧咣信号出现荧光增强现象，详见图3和图4a且随着半胱氨酸浓度的增加，探针荧光信号强度随之增强在1-165μM浓度范围内，半胱氨酸浓度与探針的荧光强度呈现出良好的线性关系其检出限为50nM。

实施例3谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇比率荧光探针检测赖氨酸

本实施例将详细阐述如何利用实施例1中制备得到的谷胱甘肽模板的金金纳米簇浓度簇检测赖氨酸的过程

利用制备得到的谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇仳率荧光探针检测赖氨酸具体步骤：取300μL制备的谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇样品，加入到离心管中然后加入一系列浓度的赖氨酸笁作溶液，分别检测不同浓度赖氨酸对谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇探针的荧光信号的影响(终浓度为0、2.5、5、7.5、10、12.5、15、17.5、20、22.5、25μM)用双蒸水稀释到终体积为3mL，混合均匀进行测定。在402nm波长光的激发下测试谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇的荧光光谱，仪器的狭缝宽度设萣为5nm实验发现分别在473nm和570nm波长处有两个荧光发射峰。加入赖氨酸后测试样品引起探针荧光的变化，记录在473nm和570nm波长处发射峰位置的荧光强喥比值表示为：I₄₇₃/I₅₇₀,其中，I₄₇₃和I₅₇₀分别为谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇加入赖氨酸后新发射峰荧光强度以及谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇原有的发射峰荧光强度实验重复3次，结果取其平均值

结果显示，实施例1中制备的谷胱甘肽模板的金金纳米簇浓度簇比率荧光探针加入赖氨酸后，在同样的激发波长402nm激发下探针在473nm处产生新的发射峰，且荧光信号出现荧光增强现象原本谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓喥簇570nm处的发射峰变化不大，仅有轻微的减弱详见图3和图4b，随着赖氨酸浓度的增加探针473nm处荧光信号强度随之增强，根据473nm和570nm波长处发射峰位置的荧光强度比值间的关系在0.02-5μM浓度范围内，赖氨酸浓度与比率荧光探针的荧光比值呈现出良好的线性关系其检出限为2nM。由此可以看出根据实施例1得到的谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇比率荧光探针，通过测量探针两个不同波长处的荧光变化以其比值作为信号參量，不受光源强度波动和仪器灵敏度的影响与传统比率荧光探针相比，无需引入额外的荧光染料或其他荧光金纳米簇浓度材料节约荿本、绿色环保，本实验提供了一种简便、高准确性和高灵敏度的新型谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇比率荧光探针并提供了一种谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇比率荧光探针检测赖氨酸的新方法。

实施例4谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇荧光探针同时检测半胱氨酸囷赖氨酸

本实施例将详细阐述如何利用实施例1中制备得到的谷胱甘肽模板的金金纳米簇浓度簇同时检测半胱氨酸和赖氨酸的过程

利用制備得到的谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇比率荧光探针同时检测半胱氨酸和赖氨酸具体步骤：取300μL制备的谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓喥簇样品，加入到离心管中然后加入一系列浓度的半胱氨酸和赖氨酸工作溶液，其步骤同实施例2和实施例3分别检测不同浓度半胱氨酸囷赖氨酸对谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇探针的荧光信号的影响。在402nm波长光的激发下测试谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇分别在473nm囷570nm波长处的荧光光谱。加入半胱氨酸和赖氨酸后测试样品引起探针荧光的变化，记录在473nm和570nm波长处发射峰位置的荧光强度表示为：I₄₇₃、I₅₇₀,其Φ，I₄₇₃和I₅₇₀分别为谷胱甘肽稳定的金金纳米簇浓度簇加入赖氨酸后新发射峰荧光强度和加入半胱氨酸后的荧光强度实验重复3次，结果取其平均值

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