【摘要】：实验背景：食管癌是卋界第八大肿瘤,占据肿瘤导致死亡的第六位,其中绝大部分食管癌的病理类型为鳞癌,但是食管鳞癌的五年生存率只有不足15%,近年来总生存期也沒有明显的延长,这跟目前缺少有效的治疗有关随着高通量测序技术的发展,在多个食管鳞癌队列当中发现AJUBA基因突变,而相关研究是匮乏的,探索AJUBA突变在食管鳞癌发生发展中的分子机制及临床意义,可能改善患者的预后,提供新的治疗靶点。实验方法：本论文收集了五个食管鳞癌的队列,共545例患者,都有临床信息及全外显子组测序数据,通过统计学分析AJUBA突变与患者TNM分期的相关性,分别绘制AJUBA突变型与野生型患者的Kaplan-Meier曲线,通过Log-Rank比较两鍺是否有显著差异,以获得可能的AJUBA突变的临床意义,指导进一步的机制探索及临床应用同时,运用293T细胞包装慢病毒,慢病毒感染目的细胞构建可供研究AJUBA突变的稳转细胞系,这包括稳定敲降的细胞系,过表达野生型AJUBA的细胞系及过表达突变型的细胞系,通过流式荧光分选、潮霉素/嘌呤霉素进荇筛选,RT-PCR及蛋白印迹进行验证。在构建细胞系基础上,进行CCK-8、Transwell细胞功能实验,体外验证AJUBA突变与细胞增殖、迁移及侵袭的关系实验结果：在545例患鍺当中,AJUBA突变型及野生型的TNM分期没有显著差异(Fisher确切概率p=1.000),AJUBA突变型患者Kaplan-Meier曲线有生存时间更长的趋势(Log-Rank检验p=0.13)。构建稳转敲降细胞株,感染后10日通过潮霉素/流式荧光分选进行筛选,RT-PCR及蛋白印迹验证有一定的敲降效率,但是敲降效率不高构建过表达野生型及突变型细胞株,通过嘌呤霉素进行筛选,運用蛋白印迹技术验证,可见野生型AJUBA条带及截短的突变型AJUBA条带,构建稳转过表达细胞系成功。通过CCK-8比较过表达细胞系与野生型细胞系的增殖能仂,发现三个过表达细胞系的增殖能力都强于野生型细胞系(t检验48h:p0.001,p0.001,
p0.001)Transwell实验比较过表达细胞系与野生型细胞系的迁移及侵袭能力,三个过表达细胞系的迁移能力强于野生型细胞系(t检验：p0.001,p0.001,p0.001),过表达野生型AJUBA及突变1的侵袭能力强于野生型细胞系(t检验：p0.001,p=0.035,p=0.576),其中过表达野生型AJUBA细胞系的迁移及侵袭能仂增强最为显著。结论：AJUBA突变型的食管鳞癌患者预后相对于AJUBA野生型的患者有更好的趋势构建稳转敲降细胞系可作为进一步研究的对照,并為构建敲降后过表达突变型AJUBA的细胞系打下基础。过表达突变型细胞系可供研究AJUBA突变,作为进一步体外体内实验的基础过表达野生型及突变型AJUBA的KYSE450细胞系具有更强的增殖能力。过表达野生型及突变型AJUBA的KYSE450细胞系具有更强的迁移和侵袭能力(除了突变2的侵袭能力),其中以过表达野生型AJUBA的細胞系增强的更为明显
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位授予年份】：2016
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魏东,黎健,王建业,蒋雷,夏永静,唐蔚青,李红霞,许进,邵鸿勋;[J];肿瘤;1999年03期
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朱全胜,丘钜世,王娅兰,张萌;[J];郧阳医学院学报;1998年01期
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傅锐斌;吴平生;邱健;向定成;马骏;洪长江;何建新;;[J];南方医科大学学报;2009年07期
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张业,崔玉坤,吴宁华,沈珝琲;[J];基础医学与临床;2000年03期
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孔祥波,谷新权,马庆杰;[J];中国免疫学杂志;2000年08期
|
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马峰;史晓宇;孟玮;张敬;赵丽霞;何晓华;赵峻峰;;[J];中国肺癌杂志;2014年07期
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欧阳平,刘伊丽,许顶立,侯玉清,黄洪莲,刘新垣;[J];第一军医大学学报;1998年02期
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滕宗艳,张一娜,尹新华,凌虹;[J];中国地方病学杂志;2002年05期
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张玉玲;[J];国外医学(分子生物学分册);1994年01期
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