贝壳粉去除水体中重金属的机理研究---优秀毕业论文 参考文献 可复..
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贝壳粉去除水体中重金属的机理研究---优秀毕业论文 参考文献 可复制黏贴
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淘豆网网友近日为您收集整理了关于麦芽根多糖的提取分离纯化及抗氧化研究的文档，希望对您的工作和学习有所帮助。以下是文档介绍：麦芽根多糖的提取分离纯化及抗氧化研究 兰州理工大学硕士学位论文麦芽根多糖的提取分离纯化及抗氧化研究姓名:杨明峰申请学位级别:硕士专业:食品科学指导教师:赵萍硕上学位论文II II摘要麦芽根是麦粒发芽后的须根,纤细而弯曲。麦芽根作为啤酒工业副产物约占大麦总投料的3%。麦芽根中含有氨基酸、蛋白质、碳水化合物、维生素和矿物质等多种元素和营养物质,目前,麦芽根在国内外主要作为饲料使用。本文以大麦麦芽根为原料,对其进行了基本营养成分分析,优化麦芽根多糖的提取工艺,并对其多糖进行分离纯化、纯度鉴定、理化性质、初级结构分析及抗氧化活性等方面的研究。具体的研究内容及结果如下:采用水提醇沉法提取麦芽根水溶性多糖,在单因素试验的基础上,通过正交试验研究了提取温度、提取时间及液料比对麦芽根多糖提取率的影响,从而确定了麦芽根多糖的最佳提取工艺参数:液料比40:I(V/w)、温度90℃、浸提3次、时间2h。麦芽根水提取的粗多糖经脱蛋白、脱色、不同乙醇浓度沉淀后得到精制的麦芽根多糖BCP30、BCP50、BCP80。BCP80经过二乙氨基乙基(DEAE)纤维素柱层析,用O~1.0mol/L NaCI溶液洗脱,分别得到三个洗脱组分,浓缩、冷冻干燥后分别为白色粉末状的多糖BCP I、BCP II、BCP[II组分。BCP II经Sephadex G.100柱层析得到两个对称峰BCP II a、BCP IIBCPIII经Sephadex G.100层析分离得到一个组分为BCPIIIa。BCP II a、BCP II b和BCPIIIa经纸层析、醋酸纤维薄膜电泳和旋光法鉴定为均一组分。麦芽根多糖纯品BCP II a、BCP II b、BCPIIIa为白色粉末状固体,可溶于水、稀酸碱,不溶于乙醇、***等有机溶剂。苯酚.硫酸反应呈阳性,斐林试剂反应呈阴性,考马斯亮蓝染色反应呈阴性,碘一碘化钾反应呈阴性,Molish反应呈阳性,三***化铁反应呈阴性。试验表明三种多糖是非还原性、不含多酚、无蛋白的多糖。经UV、m和1H.NMR分析可知,三种多糖为B.糖苷键连接的吡喃环多糖。采用水提旋蒸浓缩醇沉法提取并精制多糖,用50%和80%乙醇分段醇析分离得两种粗多糖BCP50和BCP80.用分光光度法研究了两种粗多糖在不同体系中对羟自由基、超氧自由基、DPPH自由基的清除作用、还原力以及用Rancimat油脂氧化仪测定其抗氧化活性。上述的研究结果表明,分离纯化得到的麦芽根多糖为13.糖苷键吡喃环多糖。从麦芽根中在优化工艺条件下提取的水溶性多糖,具有一定的抗氧化活性,另外,研究麦芽根多糖的抗氧化活性为研究其免疫活性与抗肿瘤、抗突变、抗病毒等的研究提供理论基础。关键词: 麦芽根多糖:提取;分离纯化鉴定;自由基;抗氧化作用麦芽根多糖的提取分离纯化及活性研究IIIAbstractBarley malt roots ate fibrous roots of malt,slender and curved.Barley malt roots asa by—product of beer industry account for about 3%of total feed.Barley malt rootscontain amino acids,proteins,carbohydrates,vitamins and minerals and other elementsand nutrients.At present,Barley malt roots mainly used as feed all over the world.Inthis paper,barley malt roots as a raw material were systematic studied on the aspect ofbasic ponent,optimization of extraction of harides from maltroots,separation,purification,physical and chemical properties,primary structure andantioxidation activity.The results are as follows:Method of water extraction and alcohol precipitation was used for extractingwater-soluble haride from malt roots.Orthogonal experiment based on thesingle factor experiments which were extraction temperature,extraction time and ratioof solid to liquid,on extraction rate of harides of malt roots.The 0ptimumextraction parameters:liquid ratio 40:1(v/w),temperature 90℃,extraction threetimes,time 2 hours.The harides of malt roots BCP30,BCP50,BCPso were obtained by waterextract,protein removal,decolorization,precipitation and refined with differentconcentration of ethan01.BCP80 was obtained after diethylamino ethyl(DEAE)cellulose column chromatography.Using 0 to 1.0 mol/L NaCI solution,elution,threefractions BCP I,BCP II,BCP 111 were obtained.The three fractions wereconcentrated and freeze.dried,white powder were obtained.BCP II purified bySephadex G·100 column chromatography was obtained two symmetrical peaks BCPII a'BCP II b.BCPIII purified by Sephadex G-100 column chromatography was obtained afraction named asBCPIIIa.By paper chromatography,cellulose acetate membraneelectrophoresis and optical rotation,BCP II a,BCP II b and BCPIIIa werehomogeneous fractions,respectively.BCP II a,BCP II b,BCPIIIa are white powdery solid,soluble in water,dilute acidand alkali,insoluble in ethanol,acetone and anic solvents.Phenol-sulfuric acidreaction was positive,negative Fehling reagent,Coomassie brilliant blue stainingreaction was negative,iodine—potassium iodide reaction was negative,Molish positivefor reaction,ferric chloride reaction was negative.Results show that the three fractionsof haride are of non-reducing,non—polyphenol,protein—free haride.UV,IR and 1H—NMR analysis,the three fractions of haride are B-glycosidiclinkage of the pyran ring haride.Rotary steam condensed by water extraction and alcohol precipitation ofⅡ硕.}:学何论文曼曼鼍!蔓I;I:I I曼蔓曼皇曼曼苎曼曼!曼曼曼璺苎!曼皇曼曼舅曼曼蔓曼皇曼曼曼苎曼曼曼!曼曼!haride extracted and purified with 50%and 80%ethanol were two separatesub.analysis of alcohol harides BCPso and BCPso,Spectrophotometry of thetwo harides in different systems on the hydroxyl radical,superoxide,DPPHradical scavenging,reducing power and lipid oxidation determined with the methord ofRancimat with witch antioxidant activity were measured.The results show that the harides separated and purified from malt roots arebeta glycosidic bond pyranoid ring haride.There exists antioxidant activityfor malt extract extracted at optimization being water-soluble haride.And more,malt haride antioxidant activity offers the base for further studies of immuneactivity,antitumour,antimutation,antiviral.Therefore,the research on harides especially malt plays an important role and broad application prospect·Key Words:isolation,purificantioxidant activityIII兰州理工大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名:咖咖每眺刃矿年6月多日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权兰州理工大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名:.彳琵移峙刷噬辄姘日期:加年日期:珈/0年占月2 El,彳月之日v,一硕r}二学位论文曼曼皇曼曼曼!鼍鲤鼍- II.=I. 二; .IIIIlI!曼曼曼曼!曼!!!曼鼍曼曼!!曼曼曼曼!曼曼!!!!曼!苎曼苎!篡曼1.1多糖的研究现状第1章绪论糖类是自然界中存在最多的有机化合物,也是最重要的生物高分子化合物和信息物质。多糖是~种以单糖为基本单位,是醛糖或者(和)***糖通过糖苷键连接在一起的天然聚合物。多糖广泛分布于高等植物、细菌、真菌、藻类以及动物体内。多糖作为药物的应用始于1943年【11,50年代后,随着化学与生物学的发展和分离技术的提高,人们才开始对多糖的结构有一定的认识。60年代左右B】,人们逐渐发现多糖具有复杂多样的生物活性和功能,多糖作为免疫促进剂引起了人们的高度关注和极大的兴趣。80年代以后,人们对多糖的认识有了飞跃的发展,还认识到了糖与蛋白质结合是构成了生命的另一种重要的物质【引。特别是近十年来人们对糖的认识更加深入,尤其是在治疗方面,多糖的药理作用越来越受到人们的普遍关注,因此,多糖的研究再次成为研究人员的研究热点,关注的焦点。各国的研究学者都在探求糖类物质的生理生物活性,使得对于植物多糖的研究有了极大的发展。目前研究较多的多糖有植物多糖、真菌多糖、海洋生物多糖、微生物多糖。多糖作为一类重要的生物活性物质,根据文献报道【4J其有抗肿瘤、抗放射、抗衰老、抗遗传损伤、降血糖、抗血栓、抗凝血等功效,这些方面都显示出多糖诱人的研究前景。目前研究发现多糖及其复合物中的糖链是生命中除肽链、核酸链之外具有重大生物学意义的第三链。虽然多糖具有如此的生物学意义,但是对其研究起步较晚,落后于蛋白质和核酸。到目前已有近100种植物的多糖被提取分离出来。我国科技工作者在多糖的研究中,特别是在真菌多糖和传统的中医药多糖研究中取得了可喜的成就。多糖的研究正在逐步活跃起来,某些分子量在几千以上,且具有很强的生物活性的多糖逐渐地被重视。这些活性多糖的结构、生理活性和化学构效关系也成为了研究多糖的前沿阵地,并且还取得了很大的研究进展。丰富的植物资源使我国在植物多糖的开发方面具有得天独厚的优势。低廉的原料成本为多糖提取的工业化、产业化的应用提供了较大的发展空间。目前市场上含量为30%的多糖,其价格为每公斤1000元人民币左右。1997年全球从植物中提取的多糖类药物销售额达73亿美元。据不完全统计,到2010年我国保健品市场销售额将达1000亿元人民币,其中植物多糖将是极有应用潜力的资源之一。活性多糖达到一定剂量时可起到治疗疾病的作用。从植物中大规模提取具有药理作用的植物多糖,经浓缩、纯化、干燥等工艺制成各种胶囊、针剂、片剂、栓剂、软膏等。多糖具有独特的理化性质,如易制成凝胶、高渗透压、高黏度的吸收性,制备人工血液;药物的缓冲剂、稳定剂、悬浮剂;人工皮肤和医用透析膜等。还可利用多糖的抗原性、抗肿瘤等生物活性制各疫苗,作为抗肿瘤、抗病毒和延缓衰老的药物。麦芽根多糖的提取分离纯化及活性研究活性多糖少剂量可防病健身,是抗衰老、增强免疫力的佳品。所以可将多糖作为重要的保健品进行开发。在工业化生产中,可直接制成高浓度的多糖粗提液,然后进一步加工制成饮料、13服液或作为营养强化剂直接加入食品中作为特殊人群的保健食品,使之由药品向功能性食品转化。在食品工业中,目前已有研究人员从海藻中开发具有降胆固醇、降血脂的多糖保健品。因此,多糖不但可作为药物进行研究,还可作为保健品进行开发。1.2多糖的来源多糖的种类繁多,来源也比较广泛。它们存在于动物、植物、微生物和藻类中。其中研究比较多的是植物多糖和微生物多糖。1.2.1植物多糖常见的植物多糖的来源主要是高等植物的根、茎、叶、皮、种子和花。从各种中草药和其它食用植物中都可以提取分离得到植物多糖。我国是植物资源相当丰富的国家,有着特别的物种资源,近年来对于植物多糖,特别是中药植物活性多糖的研究已经有广泛的报道。植物来源的多糖其单糖的组成大多数是中性糖及酸性多糖,例如1992年捷克从植物中获得一种黏胶,为鼠李半乳糖醛酸聚糖,具有止咳的功效。我国对中草药作为药物开发及理论研究,已经落后于日本、韩国等国家。目前,对活性植物多糖的研究较为深入的有麦秸多糖、竹黄多糖、黄芪多糖、刺五茄多糖、甘草多糖、桑叶多糖、孑L石笋多糖等。这些多糖基本都具有降血糖、抗血栓、抗肿瘤、抗病毒等功效。1.2.2动物多糖动物多糖的来源基本上是来自于动物的结缔组织和细胞间质,可以说是脊椎动物组织细胞外空间的特征部分。目前动物多糖的来源中最重要、用途最广的一种多糖是壳聚糖,它广泛存在于虾、蟹的外壳,昆虫的翅膀中。近年来,日本学者从贝壳中提取出具有抗癌活性成分的壳聚糖,它具有抑制小鼠肉瘤S180生长。壳聚糖具有无毒、无味、耐酸碱、耐热和耐腐蚀等特性,在医药上可作为良好的载体。另外,从动物的脾脏中获得的肝素也是多糖,肝素作为抗凝剂在临床上为心血管外科和血液透析的发展做出了贡献。透明质酸也是动物多糖的一种,广泛存在于哺乳动物的结缔组织中,另外眼球玻璃体、关节液和脐带中含量高。硫酸软骨素有保护机体组织弹性的作用。这些多糖的应用范围还在不断地扩大,以其本身的骨架结构为基础的改良产品也在出现。1.2.3微生物多糖微生物多糖包括细菌和真菌(包括霉菌和酵母)多糖,是目前研究比较具体的一种多糖。自1958年报道的酵母细胞壁多糖具有抗肿瘤、抗病毒作用以来,人们对硕.1二学位论文真菌多糖的结构和生物学效应进行了深入的研究,并取得了丰富的研究成果。目前,已发现有降血糖活性的真菌多糖有灵芝多糖、猴头多糖、云芝多糖、银耳多糖、毛木耳多糖、虫草多糖等。例如裂褶多糖、灰树花多糖等已经在欧美、日本临床上应用。我国也有部分的微生物多糖如云芝多糖等也作为新药投入了生产。1.2.4藻类多糖迄今发现全世界的藻类有30000多种,而被人们广泛应用的主要是红藻、绿藻和褐藻三类,约100余种。主要包括褐藻多糖、红藻中琼胶、卡拉胶等。海藻多糖是海藻中重要的组成部分,从海藻中提取的多糖大多含有硫酸根,其作为抗血栓药物已被大家公认。目前能够应用在工业生产上的有褐藻胶、卡拉胶、琼胶等。国外治疗艾滋病的权威机构和专家认为,从海藻中可以开发获得有价值的抗艾滋病的多糖药物。我国的海藻资源丰富、种类多,从而开发有价值的多糖前途也很大。由于海藻多糖是无热能的,能强化纤维阻止脂类吸收的效力,促进胆固醇的排除,增加肠道的蠕动,所以又是一种优质的保健食品添加剂。1.3多糖的提取方法与分离手段种类繁多的多糖,存在的种类和部位不尽相同。而且,不同种类的多糖来源其细胞壁的结构不同,在提取前需进行专门的破细胞操作,包括机械破碎佃f磨法、组织捣碎法、超声波法、压榨法、冻融法等)、溶胀和自胀、化学处理和生物酶降解等。因此,在多糖提取的研究时可采用不同的提取方法获得多糖的提取液,其包括:酸提法、酶解法、碱提法、溶剂提取法、超滤法、超声波强化法、微波法等。另外,植物多糖提取分离方法有透析法、柱层析法、分子筛分离法、中空纤维超滤法、缓冻法等。通过这些提取分离方法的应用,可以从不同种类的植物、动物、微生物等多糖的来源中获得研究者需要研究的多糖。1.3.1多糖的提取方法1.3.1.1酸提取法有的植物多糖适合于稀酸提取,这样提取可能得到更高的提取率。例如:有孟宪元等【5l在茜草多糖提取与分析研究中,发现相对于水提,以稀酸提取茜草多糖,产品纯度较高。具体方法如下:茜草根粗粉10009,5%HCI浸泡,离心,取上清液加入乙醇并调节至浓度为70%,静置,2500rpm离心,收集棕色沉淀物,95%乙醇洗涤3次,以4%HCI溶解,加1%活性炭脱色,真空抽滤,滤液4&C过夜,弃去容器底部少许沉淀物,溶液置透析袋内,逆水法透析3日,冷冻干燥,得白色粉末约109(多糖A1。如赵宇等【6】对海蒿子多糖的提取方法研究发现,以硫酸根含量及粗多糖得率等为考察因素,酸提方法好于水提取法。白英等1.7J对麦胚多糖提取工艺的研究,考察了酸提取法对麦胚多糖的影响,其结果是酸提取的效果没有水提取的效果好。麦芽根多糖的提取分离纯化及活性研究综合这些因素,在选择提取方法时,酸提取的效果并不优于其他的提取方法。酸提取法有其特殊性,只在一些特定的植物中占据优势。因此,目前酸提取法的优势报道并不多。原因有:其一,酸提取法优劣需要根据具体的原料和多糖的种类来判定;其二,在操作上应严格地控制酸度,因为酸性条件下可能使多糖的糖苷键断裂,这样就达不到提取的目的。1.3.1.2酶解法董彩霞等【8l利用纤维素酶作用于香菇细胞的细胞壁,使之破裂,多糖易从细胞中释放出来,以提高多糖的提取率。也有研究表明,先采用中性蛋白酶处理香菇粗粉,蛋白酶将与多糖结合的蛋白质酶解,使多糖释放出来,此法与传统工艺相比,提取率提高40%以上,多糖中杂蛋白的含量降低了50%,在提高产率的同时增加了多糖的纯度【9】。1.3.1.3碱提取法与酸提法类似,有些多糖在碱液中有更高的提取率,尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。为防止多糖降解,常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。如Hayashi Katsuhik0110l发明了一种从绿色藻类中提取酸性多糖的方法,而这种多糖用常规的热水法是无法得到的。具体过程为:将干燥的绿藻粉末制成悬浮液,热水浸泡提取或将含水绿藻直接用热水提取后离心分离,取黏稠的固状物,加入碱水,在pH值≥10的条件下再进行搅拌提取,碱水提取液在搅拌的同时加入酸水调节pH值至3&--4,静置沉降后离心得到酸性多糖。同样,碱提法优势也因多糖类的不同而异。与酸提法类似,碱提法中碱的浓度也应得到有效的控制,因为有些多糖在碱性较强时会水解【11l。另外,稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析,浓缩与醇析而获得多糖沉淀。1,3.1.4溶剂提取法溶剂提取法112J是从植物中提取多糖的常用方法,溶剂提取法首先要考虑的因素是选择溶剂,一般都应遵循相似相溶的原则,即极性强的有效成分选择极性强的溶剂,极性弱的有效成分选择极性弱的溶剂。多糖是极性大分子化合物,应选择水、醇等极性强的溶剂。在所有溶剂中,水是典型的强极性溶剂,对植物组织的穿透力强,提取效率高,在生产上使用安全。它能被广泛用于各种植物多糖。用水作溶剂来提取多糖时,可用热水浸煮提取,也可用冷水浸提。水提取的多糖多数是中性多糖。一般植物多糖提取多数采用热水浸提法,该法所得多糖提取液可直接或离心除去不溶物;或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质,用高浓度乙醇沉淀提纯多糖;但由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同,它也可用于样品中不同多糖组分的分级分离;还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离;其中,以乙醇沉淀最为普遍u引。硕十学位论文曼曼曼曼曼曼Im m aI;= o。曼!曼鼍如邱宏端等【HJ在提取枸杞、红枣、甘薯、淮山及花菇5种原料多糖的优化条件中,加水比例分别为:枸杞、红枣1:10,花菇1:15,甘薯1:3,淮山1:9;提取温度:80&-95℃;提取时间l'-'3h。5种原料在优化条件下的多糖提取率相对于植物取样质量分别为:枸杞51.8%、红枣53.2%、花菇28.2%、甘薯18.8%、淮山18-3%。李宏燕等【15】在紫菜粗多糖提取方式研究中热水提取控制条件为:温度为20~100℃,水与紫菜的液固质__量tL(20&--'50),提取时间30min。最终得率为2.05%。周峙苗等【16】得到热水浸提羊栖菜多糖的最佳因素:浸提温度为煮沸, pH为3.0,浸提时间为3h,固液比为1:35,提取得率为7.4%。李战117J对三种紫球藻的提取工艺研究表明三种紫球藻的最佳提取工艺各不相同。溶剂提取是常用的传统方法之一,有其自身的优点。如不需特殊设备,成本低等,但此法往往提取效率低且费时,因此,近年来,伴随着现代工业工程技术的迅猛发展,一些现代高新技术不断被应用到植物多糖的提取中。1.3.1.5超声波法超声提取法旧是应用超声波强化提取植物多糖的方法,是一种物理破碎过程。超声波是频率在20000Hz以上的声波,对媒质主要产生独特的机械振动作用和空化作用,使媒质结构发生变化,促使有效成分进入溶剂中。同时,超声波还会使液体产生空化作用。此外,超声波还产生许多次级效应如热效应、化学效应、凝聚效应、生物效应、扩散、乳化、击碎等也能加速植物有效成份在溶剂中的扩散释放,有利于多糖提取。与常规提取法相比,超声波提取可缩短提取时间,提高提取率,所以超声波法提取在植物多糖的提取中得到广泛的应用。念保义等【9J利用超声波辅助热水法从香菇中浸提香菇多糖,不仅可以缩短提取时间,减小液料比,而且提高了提取率,降低了生产成本。李军生等【18】发现,超声法处理可使南瓜多糖的提取时间缩短,在一定范围内随着超声波的使用功率的增大,提取所得的南瓜总糖、还原糖和多糖的产量也随之提高,温度与超声波可以协同作用,共同提高南瓜多糖的提取率。孟江等【19】研究却发现,对于大枣渣多糖,超声60min,多糖得率及含量均最高,得到超声辅助提取多糖的优化工艺为大枣渣加40倍体积水,超声60rain,70%的乙醇沉淀。以超声波有效强化提取植物多糖的还有王谢20】等应用气升式反应器超声破碎海带提取硫酸酯多糖,王航宇等【21】用超声波提取甘草多糖,赵兵等【22J用超声波提取海藻多糖。1.3.1.6微波法提取微波是一种电磁波其频率介于300MHz和300GHz之间,提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部,由于溶剂及细胞液吸收微波能,细胞内部温度升高,压力增大,当压力超过细胞壁的承受能力时,细胞壁破裂,位于播放器加载中，请稍候...
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